1 乙醇浸泡

    在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干。

2 无盐水浸泡

    室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的*溶胀。

3 盐酸浸泡

    在常温下再用0.1M HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性。

4 装柱

将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层。

5 平衡

上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）。

6 上样

凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可。

7 洗脱方法

    可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化。

8 清洗

    每次用完之后，将柱子里的缓冲液置换为去离子水，然后用20%的乙醇封存。

9 在位清洗（CIP）

     凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。