大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法。
一、选择试剂
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
二、加样
大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒可能原因：
1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；
2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；
3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒解决办法：
1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2） 加样后及时放入孵箱。
3） 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4） 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5） 标本较多时，请分批操作。
常见大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒实验技术要点，不看就没了！
开元旗牌技术专员对解析出其实验技术要点，下面一起来看看吧。
1. 准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等；
2. 根据检测标本数量确定所需试剂的量；
3. 按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂；
4. 标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备，尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存。
实验中为了确定*佳信号和*背景应将捕获抗体（0.5-4μg/ml）和检测抗体（0.25-2μg/ml）在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。
一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
为了优化灵敏度，建议过夜孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
扫一扫，关注微信
当前位置：